1. Parte da dissertação de mestrado do primeiro autor, financiada pela FAPESP
   
2. Mestrando do Programa de Genética e Melhoramento Animal – Unesp/Jaboticabal. Bolsista da FAPESP. E-mail: renatouem@yahoo.com.br
   
3. Departamento de Melhoramento e Nutrição Animal – FMVZ – Unesp/Botucatu
   
4. Departamento de Química e Bioquímica – IBB – Unesp/Botucatu

Resumo: Os objetivos deste trabalho foram a proposição de método alternativo de genotipagem do SNP T1900C (AY731081) do gene CD14 do sistema imune de eqüinos (Equus caballus) por meio da técnica de PCR-RFLP, bem como a determinação das freqüências alélicas e genotípicas deste polimorfismo na raça Mangalarga. Para tanto, foram coletadas amostras de sangue de 151 cavalos em seis fazendas do estado de São Paulo. O DNA foi extraído das amostras de sangue e um fragmento de 259 pares de base do gene CD14 foi amplificado por PCR. Este foi digerido pela enzima AciI e o produto da digestão submetido a eletroforese em gel de agarose de alta resolução a 3%. O padrão de bandas obtido foi visualizado em luz UV e fotodocumentado em sistema digital. O alelo C do polimorfismo do gene CD14 eqüino apresentou-se fixo na amostra de animais estudados, onde apenas animais de genótipo CC foram encontrados. Embora a provável inexistência do SNP na Mangalarga não permita estudos de associação entre o marcador e características de importância na raça, o método de PCRRFLP mostrou-se robusto, de baixo custo e apropriado para laboratórios de estrutura básica em equipamentos e reagentes, o que permitirá a expansão da análise desse polimorfismo em raças de equinos em que ocorra.

Palavras-chave: CD14, DNA, eqüídeo, Mangalarga, PCR-RFLP, polimorfismo

abstract: The objectives of this study were to propose an alternative method for genotyping of the T1900C (AY731081) SNP of the CD14 gene of the immune system of horses (Equus caballus) by the technique of PCR-RFLP, and the determination of allelic and genotypic frequencies of this polymorphism on Mangalarga breed. Thus, we collected blood samples from 151 horses on six farms in the state of São Paulo. DNA was extracted from blood samples and a fragment of 259 base pairs of the CD14 gene was amplified by PCR. The amplification was digested by the AciI enzyme and subjected to electrophoresis in 3% high resolution agarose gel. The pattern of obtained bands was viewed in UV light and photo documented in digital system. The C allele of the polymorphism of the CD14 equine gene was fixed in the sample of animals studied, where only animals of CC genotype was found. Although the probable absence of the SNP in the Mangalarga not allow association studies between the marker and traits of importance in the breed, the method of PCR-RFLP proved to be robust, inexpensive and suitable for laboratories in the basic structure of equipment and reagents, which will expand the analysis of the polymorphism in equine breeds in which it occurs.

Keywords: CD14, DNA, equine, Mangalarga, PCR-RFLP, polymorphism

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