1. Pesquisa realizada com o apoio da FAPEMIG e CNPq
2. Bolsista de Iniciação Científica da FAPEMIG, Depto. de Zootecnia da UFV, Viçosa-MG. turu_vb@yahoo.com.br
3. Pós-Doutoranda, Depto. de Zootecnia/UFV, Viçosa-MG, *Bolsista da Fapemig. eamufv@yahoo.com.br
4. Professor do Depto. de Zootecnia/UFV, Viçosa-MG. ctorres@ufv.br
   
   

Resumo: Objetivou-se avaliar se a adição de colesterol ou vitamina E a espermatozóides bovinos antes da criopreservação melhora a sobrevivência espermática. Ejaculados (n=24) de quatro bovinos foram diluídos para 120 milhões de células/mL com diluente Tris e divididos em 7 tratamentos: T1: controle; T2: 1,5 mg de colesterol carregados por ciclodextrinas (CCC)/120 milhões de células; T3-T7: 5; 10; 20; 30 e 50 mg/120 milhões de células de ciclodextrina carregada com vitamina E, respectivamente. As amostras foram incubadas por 15 minutos a 22°C, depois diluídas 1:1 em diluente Tris com 20% de gema de ovo e resfriada a 5°C por 2hs. Logo, após, as amostras foram diluídas 1:1 com diluente Tris contendo 10% de gema de ovo e 16% de glicerol, envasadas em palhetas de 0,5 mL, congeladas a 4,5 cm acima do vapor de nitrogênio líquido por 20 minutos, antes de serem imersas no nitrogênio líquido e armazenadas. As palhetas foram descongeladas a 37°C/30 segundos e a motilidade foi determinada utilizando sistema computacional de análise espermática (CASA). Diferença entre tratamentos foi avaliada usando análise de variância. A motilidade total e progressiva dos espermatozóides tratado com CCC (T2) foi maior que os tratados com vitamina E (T3-T7) e os do controle (P<0,05). Adição de CCC ao sêmen fresco de bovinos antes da criopreservação melhora a sobrevivência das células criopreservadas.

Palavras-chave: alfa-tocoferol, congelamento, esteróide, motilidade, sêmen

Effect of adding cholesterol or vitamin E to bull sperm membrane on sperm motility after cryopreservation

abstract: The objective was to evaluate the effect of adding cholesterol or vitamin E to the bull sperm prior the cryopreservation to optimize sperm cryosurvival. Ejaculates (n=24) from four bulls were diluted to 120 million cells/mL in a Tris diluent and divided into four treatments: T1: control; T2: 1.5 mg CLC/120 million sperm (positive control); T3-T7: 5, 10, 20, 30 and 50 mg/120 million sperm of cyclodextrin pre-loaded with alpha-tocopherol, respectively. The samples were incubated for 15 min at 22°C, and later diluted 1:1 in Tris with 20% Egg Yolk (EY) and cooled to 5°C. After dilution 1:1 with Tris containing 10% EY and 16% glycerol, samples were allowed to equilibrate for 15 min before packaging into 0.5 mL straws, freezing in static liquid nitrogen vapor for 20 min and plunging into liquid nitrogen for storage. Straws were thawed at 37°C for 30 seconds and the motility was determined analyzed by a computer assisted sperm analysis (CASA) Treatment differences for sperm motility was determined using analysis of variance. The percentages of total and progressively motile spermatozoa were higher for spermatozoa treated with CLC than other treatments and control ones (P<0.05). Addition of CLC to the fresh bull sperm improved the cryosurvival of the cells.

Keywords: alpha-tocopherol, cryopreservation, steroid, motility, semen

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