1. Parte da Tese do primeiro autor, financiada pela FAPESP
   
2. Aluna de Doutorado do Programa de Pós-Graduação em Zootecnia da FZEA/USP, Pirassununga-SP, *Bolsista da CAPES. e-mail: lucianetavares@usp.br
   
3. Especialista em Laboratório, Depto. de Ciências Básicas/FZEA/USP, Pirassununga-SP. e-mail: spiccoli@usp.br
   
4. Especialista em Laboratório, Depto. de Ciências Básicas/FZEA/USP, Pirassununga-SP. e-mail: marciamg@usp.br
5. Prof. Dr. do Depto. de Ciências Básicas/FZEA/USP, Pirassununga-SP. e-mail: antomaia@usp.br
   
6. Profa. Dra. do Depto. de Ciências Básicas/FZEA/USP, Pirassununga-SP. e-mail: mpmelo@usp.br

Resumo: A alga Prototheca zopfii é um microrganismo patogênico que pode estar associada à mastite bovina e esta infecção ocasiona lesões irreversíveis do tecido intramamário e inúmeros prejuízos ao produtor. Estudos mostram que a P. zopfii pode ser classificada em três biotipos, sendo a P. zopfii genótipo 2 associada a mastite bovina. O trabalho teve como objetivo a caracterização molecular da P. zopfii isolada de mastite bovina de rebanhos leiteiros do sul de Minas Gerais e a comparação de parte da seqüência do gene 18S do rDNA deste isolado com as seqüências da P. zopfii encontradas em vacas com mastite na Alemanha e no Japão. As células foram cultivadas em meio ágar Sabouraud dextrose sólido (48 horas), transferidas para tampão salino fosfato pH 7,0 (PBS) e centrifugadas a 1.000 x g por 10 minutos. O pellet foi macerado com nitrogênio líquido e o DNA extraído utilizando-se o kit de extração Wizard® Genomic DNA Purification (Promega, USA). O DNA genômico da P. zopfii foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em termociclador (Eppendorf, USA) e os produtos analisados por eletroforese em gel de agarose 1,5%, corado com brometo de etídio, utilizando-se o padrão 100 pb DNA Ladder (100-2.000; Invitrogen, USA). Com base no tamanho do produto de PCR obtido (165 pb), conclui-se que a P. zopfii isolada neste estudo pertence ao genótipo 2, biotipo associado à mastite bovina, corroborando com os isolados encontrados nos outros países.

Palavras-chave: amplificação, DNA, eletroforese, genótipo, PCR, P. zopfii

Molecular characterization of Prototheca zopfii isolated from cows with mastitis of dairy herd of South of Minas Gerais

abstract: The algae Prototheca zopfii is a pathogenic microorganism that can be associated to bovine mastitis and this infection causes irreversible injuries in intramammary tissue and induces several damages to the producer. Recent studies have been shown that P. zopfii was classified in three biotypes and P. zopfii genotype 2 can be associated with bovine mastitis. The objective of this work was a molecular characterization of P. zopfii from bovine mastitis isolates from dairy herd of south of Minas Gerais and also compared with the gene sequence 18S of rDNA from P. zopfii found in cows with mastitis in Germany and in Japan. The microorganism was cultivated in agar Sabouraud dextrose solid (48 hours), transfered to phosphate buffer saline pH 7.0 (PBS) and centrifuged at 1,000 x g during 10 minutes. Pellet was macerated with liquid nitrogen and to DNA obtain was used an extraction kit Wizard® Genomic DNA Purification (Promega, USA). The genomic DNA of P. zopfii was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using a thermocycler (Eppendorf, USA). The products from PCR were analyzed by electrophoresis on 1.5% (wt./vol.) agarose gel and then stained with ethidium bromide, using standard 100 pb DNA Ladder (100- 2,000; Invitrogen, USA). In accordance to the size of the PCR product (165 pb), we concluded that P. zopfii isolated in this study was genotype 2, biotype associated to the bovine mastitis, corroborating with the P. zopfii isolated found in the other countries.

Keywords: amplification, DNA, electrophoresis, genotype, PCR, P. zopfii

Artigo na Íntegra

Associe-se ou efetue o login de associado para baixar o artigo na íntegra (PDF).